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生化技术大题


1.方法比较实验如何设计?结果如何进行统计 目的:检测候选方法的系统分析误差,包括 比例和恒定系统误差。设计:对 40-100 例病 人的标本用候选方法和对比方法同时进行分 析测定, 最后观察两者之间的差异。 统计和 分析:①做散点图—提供研究的初步结果② 进行直线回归分析 y=a+bx;X—对比方法 测定结果 , y—候方法的后升值,回归直 线的截距 a 表恒定误差,回归系数

b 比例误 差③作相关分析 酶偶联测定法中,常用的指示酶有哪些?常 监测的指示反应是什么 乳酸脱氢酶 LDH、过氧化物酶 POD, NAD(P)+或 NAD(P)H 偶联的脱氢酶及其指 示反应;偶联 H2O2 的工具酶及其指示反应 什么是层析法?层析法是如何分类的 是一种基于被分离物质的物理、化学及生物 学特性的不同,是它们在某种基质中移动速 度不同而进行分离和分析的方法。按分离原 理分为分配层析法、 吸附层析法、 离子交换、 凝胶、亲和层析法;按固定相和流动相所处 状态分为气液、气固、液液、液固层析法; 按操作形式不同分为纸层析法、 薄膜、 薄层、 柱层析法 何谓光谱分析技术?可分哪几类?他有什 么特点? 是指利用各种化学物质(包括原子、基团、 分子以及高分子化合物)具有吸收、发射或 散射光谱浦西的特点,对物质进行定性或定 量分析的技术。 分为吸收光谱分析、发射光谱分析和散射光 谱分析。 灵敏度高、 精密度和准确度高、 选择性较高、 仪器设备简单、操作易掌握、用途广泛 什么是内标法?如何选择内标物 分析时准确称取试样 W 内含待测组分 mi, 精确加入一定量某纯物质 ms 做内标物,进 样并测出峰面积 Ai 和 As,按公式计算组分 i 的百分含量。 纯度要高,结构与待测 组分相似,内标峰要与组分峰靠近但能很好 分离,内标物和被测组分的浓度相接近 影响荧光强度的因素有哪些 (1) 溶剂: 增大溶剂的极性将使电子跃迁的 能量降低,荧光增强(2)溶液的 ph 值:当 荧光物质本身为弱酸或弱碱时, 溶液 ph 值改 变将对溶液的荧光强度产生较大影响 (3) 温 度:温度升高,荧光强度降低 根据反应时间不同,目前酶活性的测定方法 分哪两类?解释两类方法并对两类方法做 出评价 定时法和连续监测法,定时法是测定酶反应 开始后某一时间内产物或底物浓度的总变化 量来求取酶反应初速度的方法,连续监测法 指连续测定酶反应过程中某一反应产物或底 物的浓度随时间的变化来求出酶反应速度的 方法 定时法评价;优点是简单,无需保温装置, 显色剂的选择也可不考虑对酶活力的影响, 缺点是如果不用预实验确定,无法了解酶作 用的这段时间内是否都是零级反应:连续监 测法评价; 优点是可动态观测酶促反应进程, 容易找到线性期,结果准确可靠,适合自动 化分析仪, 缺点是要求精确控制温度 ph 值和 底物浓度等反应条件,仪器需要具有恒温装 置及自动监测功能 自动生化分析仪常用的分光系统主要有哪 两种?各有何优缺点?目前多采用哪种? 前分光和后分光。 前分光的光路是 光源→分光元件→样品→检测器,前分光一 般不可以进行不同波长项目的不间断检测, 通常只能单项一次测完后,再测第二项: 后分光的光路是光源→样品→分光元件→检 测器, 即光源光线直接透过样品, 通过光栅, 再进行吸光度的检测。使用后分光技术,可 以在同一体系中测定多种成分。无需移动仪 器的任何部分,噪声低,分析精确度和准确 度高,故障少。后分光可以连续不断检测不 同波长的反应,但光强度过高时可引起血清 胆红素降低 目前全自动生化分析仪多采用后分光, 半自动生化分析仪也有少数采用后分光原理 试述聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点 1.具有分子筛作用; 2.样品用量少, 设备 简单;3.不带电荷,几乎无电渗作用;4.可通 过控制凝胶浓度控制调节凝胶的孔径;5.化 学性质好;6.机械强度好 何谓 roc 曲线?如何绘制 即受试者工作特征曲线,通过将连续变量设 定出多个不同的临界值,从而计算出一系列 敏感度和特异度,再以敏感度为纵坐标,1特异度为横坐标绘制而成 绘制方法:根据专业知识,对疾病组和参照 组测定的结果进行分析,确定测定值的上下 限,组距及截断点,按选择的组距间隔列累 积频数分布表,分别计算所有截断点的敏感 性,特异性和假阴性率(1-spe) ,以 sen 为纵 坐标,代表真阴性率,以(1-spe)为横坐标 表假阳性率,绘图成 Roc 曲线 影响朗伯比尔定律的因素有哪些 成立条件: 1.入射光为单色光。 2.稀溶液影响 因素: 1.非单色光的影响。 2.溶液本身的物理 化学因素影响。①溶液浓度影响②介质不均 影响③溶液发生化学变化 何谓荧光效率?要发生荧光,分子必须具有 怎样的荧光效率 荧光效率:物质产生荧光的能力,指激发态 物质发射荧光的光子数与基态分子吸收激发 光的光子数之比。分子必须有较高的荧光效 率才可发出荧光。 高效液相色谱法定量测定主要有哪些方法 归一化法,内标法,外标法,内加标准法 全面质量控制过程分那三个阶段?简述其 主要内容 标本分析前的质量保证、 分析中的质量控制、 分析后的质量评估 分析前;检验人员的培训、实验室的设置和 工作环境、实验仪器的质量保证、检测方法 的选择和评价、 试剂和标准品的选择和评价、 病人准备、标本的采集、处理、储存与转运、 实验室用水等: 分析中; 建立标准化的操作 规程、室内质控和结果分析、登记和填发报 告: 分析后;发送实验报告、室内质控的数 据管理、参加室间质量评价、病人投诉的调 查、临床信息反馈 试述π —π 和 n—π 跃迁 重要区别 1.摩尔吸光系数不同:π →π *摩尔吸光系数 在 104 左右,n→n*跃迁的摩尔吸光系数少 2.溶剂的极性对这两种跃迁的吸收峰波长影 响不同(溶剂效应) 。溶剂极性增加时,π → π *红移,n→π *蓝移。 电子跃迁类型有哪几类?为何主要是那两 种? 原因:这两种跃迁所需能量较小,吸收的波 长可用紫外及可见分光光度计测定。 何谓电泳迁移率?影响因素有哪些 在单位电场强度下,带电粒子的移动速 度称为电泳迁移率 1.电场强度(常压 2-10V/cm,高压 20-200V/cm) ; 2.电泳缓冲液①缓冲液的化学 组成②PH4.5-9.0③离子强度;3.支持介质(电 渗作用,吸附作用);4.分子的性质和形状; 5.蒸发 比较原子吸收分光光度法和紫外可见分光 光度法 比较 原子吸收 可见紫外 本质 原子吸收 分子吸收 谱带 窄带谱线吸收 宽带吸收 光源 锐线光源 连续光源 被测物状态 原子蒸气 分子状态渗液 仪器结构 分光系统在原子化器之后 分光 系统在比色杯前 测定温度 高温 常温 简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白 质的基本原理 采用两种或两种以上不同凝胶浓度或缓冲液 PH,利用样品的浓缩效应,电泳分离的电荷 效应和分子筛效应进行分离。 什么是自动生化分析仪?按反应装置的不 同将其分为哪几类?哪类最常用

和分析? 自动生化分析仪是将生物化学分析过程 中的取样、加试剂、去干扰、混合、保温反 应、自动检测、结果计算、数据处理和打印 报告,以及实验后的清洗等步骤自动化的仪 器。 根据仪器反应装置结构不同,可分为连 续流动式、离心式(严格讲也属于分立式范 畴) 、 分立式和干片式。 根据仪器的功能及复 杂程度,可分为小型、中型、大型及超大型。 根据同时可测定项目数量不同,可分为单通 道和多通道, 单通道每次只能检测一个项目, 多通道可同时检测多个项目。根据自动化程 度不同,可分为全自动化和半自动化。 分立式 试述等电聚焦电泳的优点 1.分辨率高;2.区带清晰;3.蛋白质可保持原 有活性,分离速度快;4.电泳结束后可直接 测定蛋白质的等电点 简述离子选择电极的一般作用原理 当电极置于溶液中时,电极膜与溶液界面的 离子交换和扩散作用,改变两相界面原有电 荷分布形成双电层产生膜电位;因参比电极 电位固定,所以 ISE 只随溶液中待测离子活 度或浓度变化而变化 临床生化方法学分级的依据是什么?如何 进行分级?各自用途? 分级依据:根据方法的精密度与准确的 不同,分为决定性方法,参考方法,常规方 法。1.决定性方法:用于发展及评价参考方 法和一级标准品。2.参考方法:主要应用于 鉴定常规方法, 评价其误差大小, 干扰因素, 并决定其是否可以被接受,也用于鉴定二级 标准品。3.常规方法:指方法的性能指标, 符合临床或其他目的的需要,有适当的分析 范围,而且经济实用。用于服务性实验室的 常规定量分析。 自动生化分析仪的性能指标有哪些 自动生化分析仪常用性能评价指标有精密 度、波长的准确性和线性、与其他仪器的相 关性等。 精密度包括:批内重复性、总精密度以及与 厂商估计的精密度或临床要求的精密度比较 是否合格。 波长的准确性和线性应符合要求。 不同仪器系统的测定结果存在差别,为了取 得一致的结果,有必要进行仪器之间的相关 性校正。 离子选择电极分哪几种类型 分为基本点极和敏化电极。其中基本电极又 分为晶体膜电极和非晶体膜电极,前者分为 均相膜电极和非均相膜电极,后者分为刚性 基质电极和流动载体电极;敏化电极分为气 敏电极和酶电极 比浊法的突出问题是颗粒大小对浊度曲线 有较大影响,因此,在比浊法中必须力求做 到什么? 1) 混悬液中颗粒大小应尽可能相同, 并易重 复。标准管和测定管中颗粒大小也应力求一 致 2)混悬液在一定时间内至少在 10 分钟内 应维持稳定, 也就是颗粒应该不易相互聚集、 变大变粗 简述试剂盒的性能指标的具体内容 准确度、精密度、线性范围、抗干扰作用、 灵敏度、稳定性 自动生化分析仪参数设置包括哪些 样品与试剂量、测定方法、校正方法、反应 时间、测定波长、控制因素等 简述离心密度梯度材料的选择原则 与被分离组分的生物材料不发生反应即完全 惰性,且易与所分离的生物颗粒分开;可达 到要求的密度范围,且在所要求的密度范围 内,渗透压低,ph 值和离子强度变化较小; 不会对离心设备发生腐蚀作用;容易钝化, 价格便宜易回收;浓度便于测定;对于超速 离心分析工作来说,他的物理性质和热力学 性质应是已知的 线性范围如何测定?造成线性范围变窄的 原因有哪些 选择在直线段浓度范围内进行测定。 简述常规方法选择的原则、方法学误差与评 价试验之间的关系 原则:重点考核可靠性和实用性两方面的性 能指标。 其中可靠性指标包括方法的精密度、 准确度、特异性及检测能力等。 方法评 价的实验是配合检测各种类型的分析误差而 设计的。重复性实验的目的是检测候选方法 的随机误差,即考察候选方法的精密度。回 收试验的目的是检测候选方法的比例系统误 差,衡量其准确度。干扰试验用来检测候选 方法的恒定系统误差。方法比较实验检测候 选方法的系统分析误差,包括比例和恒定系 统误差 室内质控的方法有哪些? 常规质控图、Westgard 多规则质控法、改良 Monica 质控图 室内质控的目的是什么?如何设定靶值? 简述 L-J 质控图的制作方法和结果分析 目的:检测、控制本实验室测定工作的精密 度并检测其准确度的改变,以提高常规检测 结果的一致性 如何设定靶值; 以最初 20 个数据和三至五个 月在控数据汇集的所有数据的累积平均数作 为质控品有效期内的常用靶值 制作方法;在纵坐标上标出 x、x+2s、x-2s、 x+3s、x-3s 的标志,并将其具体值标在左侧 标尺上,画出均值线(x) ,警告线(x±2s) , 失控线(x±3s) 。还应填齐图纸上的各项, 此即成为一张质控“空图” 结果分析;1)正常分布规律 2)异常表现; 曲线漂移、趋势性变化、精密度的变化、失 控 一个组分的色谱峰可用哪些参数描述?他 们在色谱分析中各有什么意义 基线、峰宽、半峰宽、峰高和峰的保留时间。 峰宽、半峰宽的大小反映了色谱柱或所选的 色谱条件的好坏;保留时间用来描述层析峰 在层析图上的位置;峰高与组分的浓度有关 试述米氏常数在酶学分析中的意义 1)鉴别酶的最适底物 2)发现同工酶 3)判 断在细胞内酶的活性是否受底物抑制 4)测 定不同抑制剂对某个酶 Km 及 Vmax 的影响, 可以区别该抑制剂是竞争性抑制剂还是非竞 争性抑制剂 5)设计适宜的底物浓度 高效液相色谱仪主要由哪些系统组成?其 关键部件是什么 流动相输送系统、 进样系统、 色谱分离系统、 检测记录数据处理系统;检测器系统 简述标本溶血对临床生化测定的影响及防 治的方法 使很多指标明显异常。 注射器和容器要清洁, 抽血时使用针头不能过小,用力不能过大, 控制止血带的使用时间,抽血后要取下针头 将血液注入容器内,混匀抗凝剂时不要用力 过大 如何确定参考值?应用时应注意哪些问 题? 参考值指对某一规定人群进行抽样测定得到 的均数值,它的建立包括参考个体、参考总 体、参考样本、准确测定、统计学处理、确 定参考值 注意问题: 1) 参考值的使用有一定的范围仅 适合于符合参考个体要求的参考人群 2)参 考值范围不能盲目的作为正常与疾病的分界 点 3)应注意年龄、性别、饮食、药物等因 素的影响 何谓临床灵敏度?临床灵敏度高的诊断试 验有哪些用途? 指在患病者中,用该诊断试验检查得到阳性 结果的百分率。 1)拟诊为严重但疗效好的 疾病,以防漏诊 2)拟诊为有一定治疗效果 的恶性肿瘤,以便早期确诊及时治疗 3)存 在多种可能疾病的诊断,可排除某一诊断 4) 普查或定期健康体检,能筛选某一疾病,以 防漏诊 试述溶血对生化试验的干扰机理 一是血细胞中高浓度组分逸出,使测定结果 增高,二是血细胞成分进入血清后因化学反 应而引起其他物质的浓度改变,三是血红蛋 白本身颜色对检测的光学干扰。 何谓临床特异度?临床特异度高的诊断试 验哟哪些用途?

指在非患病者中应用该诊断试验获得阴性结 果的百分比。 1)拟诊患有某病的概率较大 时,以便确诊 2)拟诊疾病严重,疗效与预 后均不好的疾病,以防误诊,尽早解除病人 的压力 3)拟诊疾病严重且根治方法具有较 大损害时,需确诊,以免造成病人不必要的 损害 简述影响检验结果的生物学因素 (一)生理因素对生化检验结果的影响:年 龄、性别、运动、情绪、体位改变、妊娠、 生理性波动(二)饮食和药物的影响 酶的国际单位如何规定?如何根据吸光系 数计算酶的活性单位浓度? 规定 1IU 指在规定条件下, 每分钟催化 1umol 底物转化为产物所需要的酶量 酶单位/升=(A 测定-A 对照)*(每一酶单 位规定的保温时间/实际反应保温时间)*V 总*106/L*V 标*ε 何谓生化检测的基质效应?该如何避免基 质效应的产生 基质效应是指标本中除分析物以外的其它 成分对分析物测定值的影响 减少基质效应的主要措施包括: 1、 改进 室间质评样品,使其作用更像新鲜人血清; 2、改进仪器设计及试剂组成; 3、选择方法 及方法学参数,使其适应性更强 方法比较实验如何设计?结果如何进行统 计和分析? 目的:检测候选方法的系统分析误差,包括 比例和恒定系统误差。设计:对 40-100 例病 人的标本用候选方法和对比方法同时进行分 析测定, 最后观察两者之间的差异。 统计和 分析:①做散点图—提供研究的初步结果② 进行直线回归分析 y=a+bx;X—对比方法 测定结果 , y—候方法的后升值,回归直 线的截距 a 表恒定误差,回归系数 b 比例误 差③作相关分析 酶偶联测定法中,常用的指示酶有哪些?常 监测的指示反应是什么 乳酸脱氢酶 LDH、过氧化物酶 POD, NAD(P)+或 NAD(P)H 偶联的脱氢酶及其指 示反应;偶联 H2O2 的工具酶及其指示反应 什么是层析法?层析法是如何分类的 是一种基于被分离物质的物理、化学及生物 学特性的不同,是它们在某种基质中移动速 度不同而进行分离和分析的方法。按分离原 理分为分配层析法、 吸附层析法、 离子交换、 凝胶、亲和层析法;按固定相和流动相所处 状态分为气液、气固、液液、液固层析法; 按操作形式不同分为纸层析法、 薄膜、 薄层、 柱层析法 何谓光谱分析技术?可分哪几类?他有什 么特点? 是指利用各种化学物质(包括原子、基团、 分子以及高分子化合物)具有吸收、发射或 散射光谱浦西的特点,对物质进行定性或定 量分析的技术。 分为吸收光谱分析、发射光谱分析和散射光 谱分析。 灵敏度高、 精密度和准确度高、 选择性较高、 仪器设备简单、操作易掌握、用途广泛 什么是内标法?如何选择内标物 分析时准确称取试样 W 内含待测组分 mi, 精确加入一定量某纯物质 ms 做内标物,进 样并测出峰面积 Ai 和 As,按公式计算组分 i 的百分含量。 纯度要高,结构与待测 组分相似,内标峰要与组分峰靠近但能很好 分离,内标物和被测组分的浓度相接近 影响荧光强度的因素有哪些 (1) 溶剂: 增大溶剂的极性将使电子跃迁的 能量降低,荧光增强(2)溶液的 ph 值:当 荧光物质本身为弱酸或弱碱时, 溶液 ph 值改 变将对溶液的荧光强度产生较大影响 (3) 温 度:温度升高,荧光强度降低 根据反应时间不同,目前酶活性的测定方法 分哪两类?解释两类方法并对两类方法做 出评价 定时法和连续监测法,定时法是测定酶反应 开始后某一时间内产物或底物浓度的总变化 量来求取酶反应初速度的方法,连续监测法 指连续测定酶反应过程中某一反应产物或底 物的浓度随时间的变化来求出酶反应速度的 方法 定时法评价;优点是简单,无需保温装置, 显色剂的选择也可不考虑对酶活力的影响, 缺点是如果不用预实验确定,无法了解酶作 用的这段时间内是否都是零级反应:连续监 测法评价; 优点是可动态观测酶促反应进程, 容易找到线性期,结果准确可靠,适合自动 化分析仪, 缺点是要求精确控制温度 ph 值和 底物浓度等反应条件,仪器需要具有恒温装 置及自动监测功能 自动生化分析仪常用的分光系统主要有哪 两种?各有何优缺点?目前多采用哪种? 前分光和后分光。 前分光的光路是 光源→分光元件→样品→检测器,前分光一 般不可以进行不同波长项目的不间断检测, 通常只能单项一次测完后,再测第二项: 后分光的光路是光源→样品→分光元件→检 测器, 即光源光线直接透过样品, 通过光栅, 再进行吸光度的检测。使用后分光技术,可 以在同一体系中测定多种成分。无需移动仪 器的任何部分,噪声低,分析精确度和准确 度高,故障少。后分光可以连续不断检测不 同波长的反应,但光强度过高时可引起血清 胆红素降低 目前全自动生化分析仪多采用后分光, 半自动生化分析仪也有少数采用后分光原理 试述聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点 1.具有分子筛作用; 2.样品用量少, 设备 简单;3.不带电荷,几乎无电渗作用;4.可通 过控制凝胶浓度控制调节凝胶的孔径;5.化 学性质好;6.机械强度好 何谓 roc 曲线?如何绘制 即受试者工作特征曲线,通过将连续变量设 定出多个不同的临界值,从而计算出一系列 敏感度和特异度,再以敏感度为纵坐标,1特异度为横坐标绘制而成 绘制方法:根据专业知识,对疾病组和参照 组测定的结果进行分析,确定测定值的上下 限,组距及截断点,按选择的组距间隔列累 积频数分布表,分别计算所有截断点的敏感 性,特异性和假阴性率(1-spe) ,以 sen 为纵 坐标,代表真阴性率,以(1-spe)为横坐标 表假阳性率,绘图成 Roc 曲线 影响朗伯比尔定律的因素有哪些 成立条件: 1.入射光为单色光。 2.稀溶液影响 因素: 1.非单色光的影响。 2.溶液本身的物理 化学因素影响。①溶液浓度影响②介质不均 影响③溶液发生化学变化 何谓荧光效率?要发生荧光,分子必须具有 怎样的荧光效率 荧光效率:物质产生荧光的能力,指激发态 物质发射荧光的光子数与基态分子吸收激发 光的光子数之比。分子必须有较高的荧光效 率才可发出荧光。 高效液相色谱法定量测定主要有哪些方法 归一化法,内标法,外标法,内加标准法 全面质量控制过程分那三个阶段?简述其 主要内容 标本分析前的质量保证、 分析中的质量控制、 分析后的质量评估 分析前;检验人员的培训、实验室的设置和 工作环境、实验仪器的质量保证、检测方法 的选择和评价、 试剂和标准品的选择和评价、 病人准备、标本的采集、处理、储存与转运、 实验室用水等: 分析中; 建立标准化的操作 规程、室内质控和结果分析、登记和填发报 告: 分析后;发送实验报告、室内质控的数 据管理、参加室间质量评价、病人投诉的调 查、临床信息反馈 试述π —π 和 n—π 跃迁 重要区别 1.摩尔吸光系数不同:π →π *摩尔吸光系数 在 104 左右,n→n*跃迁的摩尔吸光系数少 2.溶剂的极性对这两种跃迁的吸收峰波长影 响不同(溶剂效应) 。溶剂极性增加时,π → π *红移,n→π *蓝移。 电子跃迁类型有哪几类?为何主要是那两 种?

原因:这两种跃迁所需能量较小,吸收的波 长可用紫外及可见分光光度计测定。 何谓电泳迁移率?影响因素有哪些 在单位电场强度下,带电粒子的移动速 度称为电泳迁移率 1.电场强度(常压 2-10V/cm,高压 20-200V/cm) ; 2.电泳缓冲液①缓冲液的化学 组成②PH4.5-9.0③离子强度;3.支持介质(电 渗作用,吸附作用);4.分子的性质和形状; 5.蒸发 比较原子吸收分光光度法和紫外可见分光 光度法 比较 原子吸收 可见紫外 本质 原子吸收 分子吸收 谱带 窄带谱线吸收 宽带吸收 光源 锐线光源 连续光源 被测物状态 原子蒸气 分子状态渗液 仪器结构 分光系统在原子化器之后 分光 系统在比色杯前 测定温度 高温 常温 简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白 质的基本原理 采用两种或两种以上不同凝胶浓度或缓冲液 PH,利用样品的浓缩效应,电泳分离的电荷 效应和分子筛效应进行分离。 什么是自动生化分析仪?按反应装置的不 同将其分为哪几类?哪类最常用 自动生化分析仪是将生物化学分析过程 中的取样、加试剂、去干扰、混合、保温反 应、自动检测、结果计算、数据处理和打印 报告,以及实验后的清洗等步骤自动化的仪 器。 根据仪器反应装置结构不同,可分为连 续流动式、离心式(严格讲也属于分立式范 畴) 、 分立式和干片式。 根据仪器的功能及复 杂程度,可分为小型、中型、大型及超大型。 根据同时可测定项目数量不同,可分为单通 道和多通道, 单通道每次只能检测一个项目, 多通道可同时检测多个项目。根据自动化程 度不同,可分为全自动化和半自动化。 分立式 试述等电聚焦电泳的优点 1.分辨率高;2.区带清晰;3.蛋白质可保持原 有活性,分离速度快;4.电泳结束后可直接 测定蛋白质的等电点 简述离子选择电极的一般作用原理 当电极置于溶液中时,电极膜与溶液界面的 离子交换和扩散作用,改变两相界面原有电 荷分布形成双电层产生膜电位;因参比电极 电位固定,所以 ISE 只随溶液中待测离子活 度或浓度变化而变化 临床生化方法学分级的依据是什么?如何 进行分级?各自用途? 分级依据:根据方法的精密度与准确的 不同,分为决定性方法,参考方法,常规方 法。1.决定性方法:用于发展及评价参考方 法和一级标准品。2.参考方法:主要应用于 鉴定常规方法, 评价其误差大小, 干扰因素, 并决定其是否可以被接受,也用于鉴定二级 标准品。3.常规方法:指方法的性能指标, 符合临床或其他目的的需要,有适当的分析 范围,而且经济实用。用于服务性实验室的 常规定量分析。 自动生化分析仪的性能指标有哪些 自动生化分析仪常用性能评价指标有精密 度、波长的准确性和线性、与其他仪器的相 关性等。 精密度包括:批内重复性、总精密度以及与 厂商估计的精密度或临床要求的精密度比较 是否合格。 波长的准确性和线性应符合要求。 不同仪器系统的测定结果存在差别,为了取 得一致的结果,有必要进行仪器之间的相关 性校正。 离子选择电极分哪几种类型 分为基本点极和敏化电极。其中基本电极又 分为晶体膜电极和非晶体膜电极,前者分为 均相膜电极和非均相膜电极,后者分为刚性 基质电极和流动载体电极;敏化电极分为气 敏电极和酶电极 比浊法的突出问题是颗粒大小对浊度曲线 有较大影响,因此,在比浊法中必须力求做 到什么? 1) 混悬液中颗粒大小应尽可能相同, 并易重 复。标准管和测定管中颗粒大小也应力求一 致 2)混悬液在一定时间内至少在 10 分钟内 应维持稳定, 也就是颗粒应该不易相互聚集、 变大变粗 简述试剂盒的性能指标的具体内容 准确度、精密度、线性范围、抗干扰作用、 灵敏度、稳定性 自动生化分析仪参数设置包括哪些 样品与试剂量、测定方法、校正方法、反应 时间、测定波长、控制因素等 简述离心密度梯度材料的选择原则 与被分离组分的生物材料不发生反应即完全 惰性,且易与所分离的生物颗粒分开;可达 到要求的密度范围,且在所要求的密度范围 内,渗透压低,ph 值和离子强度变化较小; 不会对离心设备发生腐蚀作用;容易钝化, 价格便宜易回收;浓度便于测定;对于超速 离心分析工作来说,他的物理性质和热力学 性质应是已知的 线性范围如何测定?造成线性范围变窄的 原因有哪些 选择在直线段浓度范围内进行测定。 简述常规方法选择的原则、方法学误差与评 价试验之间的关系 原则:重点考核可靠性和实用性两方面的性 能指标。 其中可靠性指标包括方法的精密度、 准确度、特异性及检测能力等。 方法评 价的实验是配合检测各种类型的分析误差而 设计的。重复性实验的目的是检测候选方法 的随机误差,即考察候选方法的精密度。回 收试验的目的是检测候选方法的比例系统误 差,衡量其准确度。干扰试验用来检测候选 方法的恒定系统误差。方法比较实验检测候 选方法的系统分析误差,包括比例和恒定系 统误差 室内质控的方法有哪些? 常规质控图、Westgard 多规则质控法、改良 Monica 质控图 室内质控的目的是什么?如何设定靶值? 简述 L-J 质控图的制作方法和结果分析 目的:检测、控制本实验室测定工作的精密 度并检测其准确度的改变,以提高常规检测 结果的一致性 如何设定靶值; 以最初 20 个数据和三至五个 月在控数据汇集的所有数据的累积平均数作 为质控品有效期内的常用靶值 制作方法;在纵坐标上标出 x、x+2s、x-2s、 x+3s、x-3s 的标志,并将其具体值标在左侧 标尺上,画出均值线(x) ,警告线(x±2s) , 失控线(x±3s) 。还应填齐图纸上的各项, 此即成为一张质控“空图” 结果分析;1)正常分布规律 2)异常表现; 曲线漂移、趋势性变化、精密度的变化、失 控 一个组分的色谱峰可用哪些参数描述?他 们在色谱分析中各有什么意义 基线、峰宽、半峰宽、峰高和峰的保留时间。 峰宽、半峰宽的大小反映了色谱柱或所选的 色谱条件的好坏;保留时间用来描述层析峰 在层析图上的位置;峰高与组分的浓度有关 试述米氏常数在酶学分析中的意义 1)鉴别酶的最适底物 2)发现同工酶 3)判 断在细胞内酶的活性是否受底物抑制 4)测 定不同抑制剂对某个酶 Km 及 Vmax 的影响, 可以区别该抑制剂是竞争性抑制剂还是非竞 争性抑制剂 5)设计适宜的底物浓度 高效液相色谱仪主要由哪些系统组成?其 关键部件是什么 流动相输送系统、 进样系统、 色谱分离系统、 检测记录数据处理系统;检测器系统 简述标本溶血对临床生化测定的影响及防 治的方法 使很多指标明显异常。 注射器和容器要清洁, 抽血时使用针头不能过小,用力不能过大, 控制止血带的使用时间,抽血后要取下针头 将血液注入容器内,混匀抗凝剂时不要用力 过大

如何确定参考值?应用时应注意哪些问 题? 参考值指对某一规定人群进行抽样测定得到 的均数值,它的建立包括参考个体、参考总 体、参考样本、准确测定、统计学处理、确 定参考值 注意问题: 1) 参考值的使用有一定的范围仅 适合于符合参考个体要求的参考人群 2)参 考值范围不能盲目的作为正常与疾病的分界 点 3)应注意年龄、性别、饮食、药物等因 素的影响 何谓临床灵敏度?临床灵敏度高的诊断试 验有哪些用途? 指在患病者中,用该诊断试验检查得到阳性 结果的百分率。 1)拟诊为严重但疗效好的 疾病,以防漏诊 2)拟诊为有一定治疗效果 的恶性肿瘤,以便早期确诊及时治疗 3)存 在多种可能疾病的诊断,可排除某一诊断 4) 普查或定期健康体检,能筛选某一疾病,以 防漏诊 试述溶血对生化试验的干扰机理 一是血细胞中高浓度组分逸出,使测定结果 增高,二是血细胞成分进入血清后因化学反 应而引起其他物质的浓度改变,三是血红蛋 白本身颜色对检测的光学干扰。 何谓临床特异度?临床特异度高的诊断试 验哟哪些用途? 指在非患病者中应用该诊断试验获得阴性结 果的百分比。 1)拟诊患有某病的概率较大 时,以便确诊 2)拟诊疾病严重,疗效与预 后均不好的疾病,以防误诊,尽早解除病人 的压力 3)拟诊疾病严重且根治方法具有较 大损害时,需确诊,以免造成病人不必要的 损害 简述影响检验结果的生物学因素 (一)生理因素对生化检验结果的影响:年 龄、性别、运动、情绪、体位改变、妊娠、 生理性波动(二)饮食和药物的影响 酶的国际单位如何规定?如何根据吸光系 数计算酶的活性单位浓度? 规定 1IU 指在规定条件下, 每分钟催化 1umol 底物转化为产物所需要的酶量 酶单位/升=(A 测定-A 对照)*(每一酶单 位规定的保温时间/实际反应保温时间)*V 总*106/L*V 标*ε 88.何谓生化检测的基质效应?该如何避免 基质效应的产生 基质效应是指标本中除分析物以外的其它 成分对分析物测定值的影响 减少基质效应的主要措施包括: 1、 改进 室间质评样品,使其作用更像新鲜人血清; 2、改进仪器设计及试剂组成; 3、选择方法 及方法学参数,使其适应性更强 1.方法比较实验如何设计?结果如何进行统 计和分析? 目的:检测候选方法的系统分析误差,包括 比例和恒定系统误差。设计:对 40-100 例病 人的标本用候选方法和对比方法同时进行分 析测定, 最后观察两者之间的差异。 统计和 分析:①做散点图—提供研究的初步结果② 进行直线回归分析 y=a+bx;X—对比方法 测定结果 , y—候方法的后升值,回归直 线的截距 a 表恒定误差,回归系数 b 比例误 差③作相关分析 2.酶偶联测定法中,常用的指示酶有哪些? 常监测的指示反应是什么 乳酸脱氢酶 LDH、过氧化物酶 POD, NAD(P)+或 NAD(P)H 偶联的脱氢酶及其指 示反应;偶联 H2O2 的工具酶及其指示反应 3.什么是层析法?层析法是如何分类的 是一种基于被分离物质的物理、化学及生物 学特性的不同,是它们在某种基质中移动速 度不同而进行分离和分析的方法。按分离原 理分为分配层析法、 吸附层析法、 离子交换、 凝胶、亲和层析法;按固定相和流动相所处 状态分为气液、气固、液液、液固层析法; 按操作形式不同分为纸层析法、 薄膜、 薄层、 柱层析法 4.何谓光谱分析技术?可分哪几类?他有什 么特点? 是指利用各种化学物质(包括原子、基团、 分子以及高分子化合物)具有吸收、发射或 散射光谱浦西的特点,对物质进行定性或定 量分析的技术。 分为吸收光谱分析、发射光谱分析和散射光 谱分析。 灵敏度高、 精密度和准确度高、 选择性较高、 仪器设备简单、操作易掌握、用途广泛 5.什么是内标法?如何选择内标物 分析时准确称取试样 W 内含待测组分 mi, 精确加入一定量某纯物质 ms 做内标物,进 样并测出峰面积 Ai 和 As,按公式计算组分 i 的百分含量。 纯度要高,结构与待测 组分相似,内标峰要与组分峰靠近但能很好 分离,内标物和被测组分的浓度相接近 6.影响荧光强度的因素有哪些 (1) 溶剂: 增大溶剂的极性将使电子跃迁的 能量降低,荧光增强(2)溶液的 ph 值:当 荧光物质本身为弱酸或弱碱时, 溶液 ph 值改 变将对溶液的荧光强度产生较大影响 (3) 温 度:温度升高,荧光强度降低 7.根据反应时间不同,目前酶活性的测定方 法分哪两类?解释两类方法并对两类方法 做出评价 定时法和连续监测法,定时法是测定酶反应 开始后某一时间内产物或底物浓度的总变化 量来求取酶反应初速度的方法,连续监测法 指连续测定酶反应过程中某一反应产物或底 物的浓度随时间的变化来求出酶反应速度的 方法 定时法评价;优点是简单,无需保温装置, 显色剂的选择也可不考虑对酶活力的影响, 缺点是如果不用预实验确定,无法了解酶作 用的这段时间内是否都是零级反应:连续监 测法评价; 优点是可动态观测酶促反应进程, 容易找到线性期,结果准确可靠,适合自动 化分析仪, 缺点是要求精确控制温度 ph 值和 底物浓度等反应条件,仪器需要具有恒温装 置及自动监测功能 8.自动生化分析仪常用的分光系统主要有哪 两种?各有何优缺点?目前多采用哪种? 前分光和后分光。 前分光的光路是 光源→分光元件→样品→检测器,前分光一 般不可以进行不同波长项目的不间断检测, 通常只能单项一次测完后,再测第二项: 后分光的光路是光源→样品→分光元件→检 测器, 即光源光线直接透过样品, 通过光栅, 再进行吸光度的检测。使用后分光技术,可 以在同一体系中测定多种成分。无需移动仪 器的任何部分,噪声低,分析精确度和准确 度高,故障少。后分光可以连续不断检测不 同波长的反应,但光强度过高时可引起血清 胆红素降低 目前全自动生化分析仪多采用后分光, 半自动生化分析仪也有少数采用后分光原理 9.试述聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点 1.具有分子筛作用; 2.样品用量少, 设备 简单;3.不带电荷,几乎无电渗作用;4.可通 过控制凝胶浓度控制调节凝胶的孔径;5.化 学性质好;6.机械强度好 10.何谓 roc 曲线?如何绘制 即受试者工作特征曲线,通过将连续变量设 定出多个不同的临界值,从而计算出一系列 敏感度和特异度,再以敏感度为纵坐标,1特异度为横坐标绘制而成 绘制方法:根据专业知识,对疾病组和参照 组测定的结果进行分析,确定测定值的上下 限,组距及截断点,按选择的组距间隔列累 积频数分布表,分别计算所有截断点的敏感 性,特异性和假阴性率(1-spe) ,以 sen 为纵 坐标,代表真阴性率,以(1-spe)为横坐标 表假阳性率,绘图成 Roc 曲线 11.影响朗伯比尔定律的因素有哪些 成立条件: 1.入射光为单色光。 2.稀溶液影响 因素: 1.非单色光的影响。 2.溶液本身的物理 化学因素影响。①溶液浓度影响②介质不均 影响③溶液发生化学变化 12.何谓荧光效率?要发生荧光, 分子必须具 有怎样的荧光效率

荧光效率:物质产生荧光的能力,指激发态 物质发射荧光的光子数与基态分子吸收激发 光的光子数之比。分子必须有较高的荧光效 率才可发出荧光。 13.高效液相色谱法定量测定主要有哪些方 法 归一化法,内标法,外标法,内加标准法 14.全面质量控制过程分那三个阶段?简述 其主要内容 标本分析前的质量保证、 分析中的质量控制、 分析后的质量评估 分析前;检验人员的培训、实验室的设置和 工作环境、实验仪器的质量保证、检测方法 的选择和评价、 试剂和标准品的选择和评价、 病人准备、标本的采集、处理、储存与转运、 实验室用水等: 分析中; 建立标准化的操作 规程、室内质控和结果分析、登记和填发报 告: 分析后;发送实验报告、室内质控的数 据管理、参加室间质量评价、病人投诉的调 查、临床信息反馈 15.试述π —π 和 n—π 跃迁 重要区别 1.摩尔吸光系数不同:π →π *摩尔吸光系数 在 104 左右,n→n*跃迁的摩尔吸光系数少 2.溶剂的极性对这两种跃迁的吸收峰波长影 响不同(溶剂效应) 。溶剂极性增加时,π → π *红移,n→π *蓝移。 16.电子跃迁类型有哪几类?为何主要是那 两种? 原因:这两种跃迁所需能量较小,吸收的波 长可用紫外及可见分光光度计测定。 17.何谓电泳迁移率?影响因素有哪些 在单位电场强度下,带电粒子的移动速 度称为电泳迁移率 1.电场强度(常压 2-10V/cm,高压 20-200V/cm) ; 2.电泳缓冲液①缓冲液的化学 组成②PH4.5-9.0③离子强度;3.支持介质(电 渗作用,吸附作用);4.分子的性质和形状; 5.蒸发 18.比较原子吸收分光光度法和紫外可见分 光光度法 比较 原子吸收 可见紫外 本质 原子吸收 分子吸收 谱带 窄带谱线吸收 宽带吸收 光源 锐线光源 连续光源 被测物状态 原子蒸气 分子状态渗液 仪器结构 分光系统在原子化器之后 分光 系统在比色杯前 测定温度 高温 常温 19.简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋 白质的基本原理 采用两种或两种以上不同凝胶浓度或缓冲液 PH,利用样品的浓缩效应,电泳分离的电荷 效应和分子筛效应进行分离。 20.什么是自动生化分析仪?按反应装置的 不同将其分为哪几类?哪类最常用 自动生化分析仪是将生物化学分析过程 中的取样、加试剂、去干扰、混合、保温反 应、自动检测、结果计算、数据处理和打印 报告,以及实验后的清洗等步骤自动化的仪 器。 根据仪器反应装置结构不同,可分为连 续流动式、离心式(严格讲也属于分立式范 畴) 、 分立式和干片式。 根据仪器的功能及复 杂程度,可分为小型、中型、大型及超大型。 根据同时可测定项目数量不同,可分为单通 道和多通道, 单通道每次只能检测一个项目, 多通道可同时检测多个项目。根据自动化程 度不同,可分为全自动化和半自动化。 分立式 21.试述等电聚焦电泳的优点 1.分辨率高;2.区带清晰;3.蛋白质可保持原 有活性,分离速度快;4.电泳结束后可直接 测定蛋白质的等电点 22.简述离子选择电极的一般作用原理 当电极置于溶液中时,电极膜与溶液界面的 离子交换和扩散作用,改变两相界面原有电 荷分布形成双电层产生膜电位;因参比电极 电位固定,所以 ISE 只随溶液中待测离子活 度或浓度变化而变化 23.临床生化方法学分级的依据是什么?如 何进行分级?各自用途? 分级依据:根据方法的精密度与准确的 不同,分为决定性方法,参考方法,常规方 法。1.决定性方法:用于发展及评价参考方 法和一级标准品。2.参考方法:主要应用于 鉴定常规方法, 评价其误差大小, 干扰因素, 并决定其是否可以被接受,也用于鉴定二级 标准品。3.常规方法:指方法的性能指标, 符合临床或其他目的的需要,有适当的分析 范围,而且经济实用。用于服务性实验室的 常规定量分析。 24.自动生化分析仪的性能指标有哪些 自动生化分析仪常用性能评价指标有精密 度、波长的准确性和线性、与其他仪器的相 关性等。 精密度包括:批内重复性、总精密度以及与 厂商估计的精密度或临床要求的精密度比较 是否合格。 波长的准确性和线性应符合要求。 不同仪器系统的测定结果存在差别,为了取 得一致的结果,有必要进行仪器之间的相关 性校正。 25.离子选择电极分哪几种类型 分为基本点极和敏化电极。其中基本电极又 分为晶体膜电极和非晶体膜电极,前者分为 均相膜电极和非均相膜电极,后者分为刚性 基质电极和流动载体电极;敏化电极分为气 敏电极和酶电极 26.比浊法的突出问题是颗粒大小对浊度曲 线有较大影响,因此,在比浊法中必须力求 做到什么? 1) 混悬液中颗粒大小应尽可能相同, 并易重 复。标准管和测定管中颗粒大小也应力求一 致 2)混悬液在一定时间内至少在 10 分钟内 应维持稳定, 也就是颗粒应该不易相互聚集、 变大变粗 27.简述试剂盒的性能指标的具体内容 准确度、精密度、线性范围、抗干扰作用、 灵敏度、稳定性 28.自动生化分析仪参数设置包括哪些 样品与试剂量、测定方法、校正方法、反应 时间、测定波长、控制因素等 29.简述离心密度梯度材料的选择原则 与被分离组分的生物材料不发生反应即完全 惰性,且易与所分离的生物颗粒分开;可达 到要求的密度范围,且在所要求的密度范围 内,渗透压低,ph 值和离子强度变化较小; 不会对离心设备发生腐蚀作用;容易钝化, 价格便宜易回收;浓度便于测定;对于超速 离心分析工作来说,他的物理性质和热力学 性质应是已知的 30.线性范围如何测定?造成线性范围变窄 的原因有哪些 选择在直线段浓度范围内进行测定。 31.简述常规方法选择的原则、 方法学误差与 评价试验之间的关系 原则:重点考核可靠性和实用性两方面的性 能指标。 其中可靠性指标包括方法的精密度、 准确度、特异性及检测能力等。 方法评 价的实验是配合检测各种类型的分析误差而 设计的。重复性实验的目的是检测候选方法 的随机误差,即考察候选方法的精密度。回 收试验的目的是检测候选方法的比例系统误 差,衡量其准确度。干扰试验用来检测候选 方法的恒定系统误差。方法比较实验检测候 选方法的系统分析误差,包括比例和恒定系 统误差 32.室内质控的方法有哪些? 常规质控图、Westgard 多规则质控法、改良 Monica 质控图 33.室内质控的目的是什么?如何设定靶 值?简述 L-J 质控图的制作方法和结果分析 目的:检测、控制本实验室测定工作的精密 度并检测其准确度的改变,以提高常规检测 结果的一致性 如何设定靶值; 以最初 20 个数据和三至五个 月在控数据汇集的所有数据的累积平均数作 为质控品有效期内的常用靶值 制作方法;在纵坐标上标出 x、x+2s、x-2s、 x+3s、x-3s 的标志,并将其具体值标在左侧 标尺上,画出均值线(x) ,警告线(x±2s) ,

失控线(x±3s) 。还应填齐图纸上的各项, 此即成为一张质控“空图” 结果分析;1)正常分布规律 2)异常表现; 曲线漂移、趋势性变化、精密度的变化、失 控 34.一个组分的色谱峰可用哪些参数描述? 他们在色谱分析中各有什么意义 基线、峰宽、半峰宽、峰高和峰的保留时间。 峰宽、半峰宽的大小反映了色谱柱或所选的 色谱条件的好坏;保留时间用来描述层析峰 在层析图上的位置;峰高与组分的浓度有关 35.试述米氏常数在酶学分析中的意义 1)鉴别酶的最适底物 2)发现同工酶 3)判 断在细胞内酶的活性是否受底物抑制 4)测 定不同抑制剂对某个酶 Km 及 Vmax 的影响, 可以区别该抑制剂是竞争性抑制剂还是非竞 争性抑制剂 5)设计适宜的底物浓度 36.高效液相色谱仪主要由哪些系统组成? 其关键部件是什么 流动相输送系统、 进样系统、 色谱分离系统、 检测记录数据处理系统;检测器系统 37.简述标本溶血对临床生化测定的影响及 防治的方法 使很多指标明显异常。 注射器和容器要清洁, 抽血时使用针头不能过小,用力不能过大, 控制止血带的使用时间,抽血后要取下针头 将血液注入容器内,混匀抗凝剂时不要用力 过大 38.如何确定参考值?应用时应注意哪些问 题? 参考值指对某一规定人群进行抽样测定得到 的均数值,它的建立包括参考个体、参考总 体、参考样本、准确测定、统计学处理、确 定参考值 注意问题: 1) 参考值的使用有一定的范围仅 适合于符合参考个体要求的参考人群 2)参 考值范围不能盲目的作为正常与疾病的分界 点 3)应注意年龄、性别、饮食、药物等因 素的影响 39.何谓临床灵敏度?临床灵敏度高的诊断 试验有哪些用途? 指在患病者中,用该诊断试验检查得到阳性 结果的百分率。 1)拟诊为严重但疗效好的 疾病,以防漏诊 2)拟诊为有一定治疗效果 的恶性肿瘤,以便早期确诊及时治疗 3)存 在多种可能疾病的诊断,可排除某一诊断 4) 普查或定期健康体检,能筛选某一疾病,以 防漏诊 40.试述溶血对生化试验的干扰机理 一是血细胞中高浓度组分逸出,使测定结果 增高,二是血细胞成分进入血清后因化学反 应而引起其他物质的浓度改变,三是血红蛋 白本身颜色对检测的光学干扰。 41.何谓临床特异度?临床特异度高的诊断 试验哟哪些用途? 指在非患病者中应用该诊断试验获得阴性结 果的百分比。 1)拟诊患有某病的概率较大 时,以便确诊 2)拟诊疾病严重,疗效与预 后均不好的疾病,以防误诊,尽早解除病人 的压力 3)拟诊疾病严重且根治方法具有较 大损害时,需确诊,以免造成病人不必要的 损害 42.简述影响检验结果的生物学因素 (一)生理因素对生化检验结果的影响:年 龄、性别、运动、情绪、体位改变、妊娠、 生理性波动(二)饮食和药物的影响 43.酶的国际单位如何规定?如何根据吸光 系数计算酶的活性单位浓度? 规定 1IU 指在规定条件下, 每分钟催化 1umol 底物转化为产物所需要的酶量 酶单位/升=(A 测定-A 对照)*(每一酶单 位规定的保温时间/实际反应保温时间)*V 总*106/L*V 标*ε 44.何谓生化检测的基质效应?该如何避免 基质效应的产生 基质效应是指标本中除分析物以外的其它 成分对分析物测定值的影响 减少基质效应的主要措施包括: 1、 改进 室间质评样品,使其作用更像新鲜人血清; 2、改进仪器设计及试剂组成; 3、选择方法 及方法学参数,使其适应性更强 45.方法比较实验如何设计?结果如何进行 统计和分析? 目的:检测候选方法的系统分析误差,包括 比例和恒定系统误差。设计:对 40-100 例病 人的标本用候选方法和对比方法同时进行分 析测定, 最后观察两者之间的差异。 统计和 分析:①做散点图—提供研究的初步结果② 进行直线回归分析 y=a+bx;X—对比方法 测定结果 , y—候方法的后升值,回归直 线的截距 a 表恒定误差,回归系数 b 比例误 差③作相关分析 46.酶偶联测定法中, 常用的指示酶有哪些? 常监测的指示反应是什么 乳酸脱氢酶 LDH、过氧化物酶 POD, NAD(P)+或 NAD(P)H 偶联的脱氢酶及其指 示反应;偶联 H2O2 的工具酶及其指示反应 47.什么是层析法?层析法是如何分类的 是一种基于被分离物质的物理、化学及生物 学特性的不同,是它们在某种基质中移动速 度不同而进行分离和分析的方法。按分离原 理分为分配层析法、 吸附层析法、 离子交换、 凝胶、亲和层析法;按固定相和流动相所处 状态分为气液、气固、液液、液固层析法; 按操作形式不同分为纸层析法、 薄膜、 薄层、 柱层析法 48.何谓光谱分析技术?可分哪几类?他有 什么特点? 是指利用各种化学物质(包括原子、基团、 分子以及高分子化合物)具有吸收、发射或 散射光谱浦西的特点,对物质进行定性或定 量分析的技术。 分为吸收光谱分析、发射光谱分析和散射光 谱分析。 灵敏度高、 精密度和准确度高、 选择性较高、 仪器设备简单、操作易掌握、用途广泛 49.什么是内标法?如何选择内标物 分析时准确称取试样 W 内含待测组分 mi, 精确加入一定量某纯物质 ms 做内标物,进 样并测出峰面积 Ai 和 As,按公式计算组分 i 的百分含量。 纯度要高,结构与待测 组分相似,内标峰要与组分峰靠近但能很好 分离,内标物和被测组分的浓度相接近 50.影响荧光强度的因素有哪些 (1) 溶剂: 增大溶剂的极性将使电子跃迁的 能量降低,荧光增强(2)溶液的 ph 值:当 荧光物质本身为弱酸或弱碱时, 溶液 ph 值改 变将对溶液的荧光强度产生较大影响 (3) 温 度:温度升高,荧光强度降低 51.根据反应时间不同, 目前酶活性的测定方 法分哪两类?解释两类方法并对两类方法 做出评价 定时法和连续监测法,定时法是测定酶反应 开始后某一时间内产物或底物浓度的总变化 量来求取酶反应初速度的方法,连续监测法 指连续测定酶反应过程中某一反应产物或底 物的浓度随时间的变化来求出酶反应速度的 方法 定时法评价;优点是简单,无需保温装置, 显色剂的选择也可不考虑对酶活力的影响, 缺点是如果不用预实验确定,无法了解酶作 用的这段时间内是否都是零级反应:连续监 测法评价; 优点是可动态观测酶促反应进程, 容易找到线性期,结果准确可靠,适合自动 化分析仪, 缺点是要求精确控制温度 ph 值和 底物浓度等反应条件,仪器需要具有恒温装 置及自动监测功能 52.自动生化分析仪常用的分光系统主要有 哪两种?各有何优缺点?目前多采用哪 种? 前分光和后分光。 前分光的光路是 光源→分光元件→样品→检测器,前分光一 般不可以进行不同波长项目的不间断检测, 通常只能单项一次测完后,再测第二项: 后分光的光路是光源→样品→分光元件→检 测器, 即光源光线直接透过样品, 通过光栅, 再进行吸光度的检测。使用后分光技术,可 以在同一体系中测定多种成分。无需移动仪 器的任何部分,噪声低,分析精确度和准确 度高,故障少。后分光可以连续不断检测不

同波长的反应,但光强度过高时可引起血清 胆红素降低 目前全自动生化分析仪多采用后分光, 半自动生化分析仪也有少数采用后分光原理 53.试述聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点 1.具有分子筛作用; 2.样品用量少, 设备 简单;3.不带电荷,几乎无电渗作用;4.可通 过控制凝胶浓度控制调节凝胶的孔径;5.化 学性质好;6.机械强度好 54.何谓 roc 曲线?如何绘制 即受试者工作特征曲线,通过将连续变量设 定出多个不同的临界值,从而计算出一系列 敏感度和特异度,再以敏感度为纵坐标,1特异度为横坐标绘制而成 绘制方法:根据专业知识,对疾病组和参照 组测定的结果进行分析,确定测定值的上下 限,组距及截断点,按选择的组距间隔列累 积频数分布表,分别计算所有截断点的敏感 性,特异性和假阴性率(1-spe) ,以 sen 为纵 坐标,代表真阴性率,以(1-spe)为横坐标 表假阳性率,绘图成 Roc 曲线 55.影响朗伯比尔定律的因素有哪些 成立条件: 1.入射光为单色光。 2.稀溶液影响 因素: 1.非单色光的影响。 2.溶液本身的物理 化学因素影响。①溶液浓度影响②介质不均 影响③溶液发生化学变化 56.何谓荧光效率?要发生荧光, 分子必须具 有怎样的荧光效率 荧光效率:物质产生荧光的能力,指激发态 物质发射荧光的光子数与基态分子吸收激发 光的光子数之比。分子必须有较高的荧光效 率才可发出荧光。 57.高效液相色谱法定量测定主要有哪些方 法 归一化法,内标法,外标法,内加标准法 58.全面质量控制过程分那三个阶段?简述 其主要内容 标本分析前的质量保证、 分析中的质量控制、 分析后的质量评估 分析前;检验人员的培训、实验室的设置和 工作环境、实验仪器的质量保证、检测方法 的选择和评价、 试剂和标准品的选择和评价、 病人准备、标本的采集、处理、储存与转运、 实验室用水等: 分析中; 建立标准化的操作 规程、室内质控和结果分析、登记和填发报 告: 分析后;发送实验报告、室内质控的数 据管理、参加室间质量评价、病人投诉的调 查、临床信息反馈 59.试述π —π 和 n—π 跃迁 重要区别 1.摩尔吸光系数不同:π →π *摩尔吸光系数 在 104 左右,n→n*跃迁的摩尔吸光系数少 2.溶剂的极性对这两种跃迁的吸收峰波长影 响不同(溶剂效应) 。溶剂极性增加时,π → π *红移,n→π *蓝移。 60.电子跃迁类型有哪几类?为何主要是那 两种? 原因:这两种跃迁所需能量较小,吸收的波 长可用紫外及可见分光光度计测定。 61.何谓电泳迁移率?影响因素有哪些 在单位电场强度下,带电粒子的移动速 度称为电泳迁移率 1.电场强度(常压 2-10V/cm,高压 20-200V/cm) ; 2.电泳缓冲液①缓冲液的化学 组成②PH4.5-9.0③离子强度;3.支持介质(电 渗作用,吸附作用);4.分子的性质和形状; 5.蒸发 62.比较原子吸收分光光度法和紫外可见分 光光度法 比较 原子吸收 可见紫外 本质 原子吸收 分子吸收 谱带 窄带谱线吸收 宽带吸收 光源 锐线光源 连续光源 被测物状态 原子蒸气 分子状态渗液 仪器结构 分光系统在原子化器之后 分光 系统在比色杯前 测定温度 高温 常温 63.简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋 白质的基本原理 采用两种或两种以上不同凝胶浓度或缓冲液 PH,利用样品的浓缩效应,电泳分离的电荷 效应和分子筛效应进行分离。 64.什么是自动生化分析仪?按反应装置的 不同将其分为哪几类?哪类最常用 自动生化分析仪是将生物化学分析过程 中的取样、加试剂、去干扰、混合、保温反 应、自动检测、结果计算、数据处理和打印 报告,以及实验后的清洗等步骤自动化的仪 器。 根据仪器反应装置结构不同,可分为连 续流动式、离心式(严格讲也属于分立式范 畴) 、 分立式和干片式。 根据仪器的功能及复 杂程度,可分为小型、中型、大型及超大型。 根据同时可测定项目数量不同,可分为单通 道和多通道, 单通道每次只能检测一个项目, 多通道可同时检测多个项目。根据自动化程 度不同,可分为全自动化和半自动化。 分立式 65.试述等电聚焦电泳的优点 1.分辨率高;2.区带清晰;3.蛋白质可保持原 有活性,分离速度快;4.电泳结束后可直接 测定蛋白质的等电点 66.简述离子选择电极的一般作用原理 当电极置于溶液中时,电极膜与溶液界面的 离子交换和扩散作用,改变两相界面原有电 荷分布形成双电层产生膜电位;因参比电极 电位固定,所以 ISE 只随溶液中待测离子活 度或浓度变化而变化 67.临床生化方法学分级的依据是什么?如 何进行分级?各自用途? 分级依据:根据方法的精密度与准确的 不同,分为决定性方法,参考方法,常规方 法。1.决定性方法:用于发展及评价参考方 法和一级标准品。2.参考方法:主要应用于 鉴定常规方法, 评价其误差大小, 干扰因素, 并决定其是否可以被接受,也用于鉴定二级 标准品。3.常规方法:指方法的性能指标, 符合临床或其他目的的需要,有适当的分析 范围,而且经济实用。用于服务性实验室的 常规定量分析。 68.自动生化分析仪的性能指标有哪些 自动生化分析仪常用性能评价指标有精密 度、波长的准确性和线性、与其他仪器的相 关性等。 精密度包括:批内重复性、总精密度以及与 厂商估计的精密度或临床要求的精密度比较 是否合格。 波长的准确性和线性应符合要求。 不同仪器系统的测定结果存在差别,为了取 得一致的结果,有必要进行仪器之间的相关 性校正。 69.离子选择电极分哪几种类型 分为基本点极和敏化电极。其中基本电极又 分为晶体膜电极和非晶体膜电极,前者分为 均相膜电极和非均相膜电极,后者分为刚性 基质电极和流动载体电极;敏化电极分为气 敏电极和酶电极 70.比浊法的突出问题是颗粒大小对浊度曲 线有较大影响,因此,在比浊法中必须力求 做到什么? 1) 混悬液中颗粒大小应尽可能相同, 并易重 复。标准管和测定管中颗粒大小也应力求一 致 2)混悬液在一定时间内至少在 10 分钟内 应维持稳定, 也就是颗粒应该不易相互聚集、 变大变粗 71.简述试剂盒的性能指标的具体内容 准确度、精密度、线性范围、抗干扰作用、 灵敏度、稳定性 72.自动生化分析仪参数设置包括哪些 样品与试剂量、测定方法、校正方法、反应 时间、测定波长、控制因素等 73.简述离心密度梯度材料的选择原则 与被分离组分的生物材料不发生反应即完全 惰性,且易与所分离的生物颗粒分开;可达 到要求的密度范围,且在所要求的密度范围 内,渗透压低,ph 值和离子强度变化较小; 不会对离心设备发生腐蚀作用;容易钝化, 价格便宜易回收;浓度便于测定;对于超速 离心分析工作来说,他的物理性质和热力学 性质应是已知的 74.线性范围如何测定?造成线性范围变窄 的原因有哪些

选择在直线段浓度范围内进行测定。 75.简述常规方法选择的原则、 方法学误差与 评价试验之间的关系 原则:重点考核可靠性和实用性两方面的性 能指标。 其中可靠性指标包括方法的精密度、 准确度、特异性及检测能力等。 方法评 价的实验是配合检测各种类型的分析误差而 设计的。重复性实验的目的是检测候选方法 的随机误差,即考察候选方法的精密度。回 收试验的目的是检测候选方法的比例系统误 差,衡量其准确度。干扰试验用来检测候选 方法的恒定系统误差。方法比较实验检测候 选方法的系统分析误差,包括比例和恒定系 统误差 76.室内质控的方法有哪些? 常规质控图、Westgard 多规则质控法、改良 Monica 质控图 77.室内质控的目的是什么?如何设定靶 值?简述 L-J 质控图的制作方法和结果分析 目的:检测、控制本实验室测定工作的精密 度并检测其准确度的改变,以提高常规检测 结果的一致性 如何设定靶值; 以最初 20 个数据和三至五个 月在控数据汇集的所有数据的累积平均数作 为质控品有效期内的常用靶值 制作方法;在纵坐标上标出 x、x+2s、x-2s、 x+3s、x-3s 的标志,并将其具体值标在左侧 标尺上,画出均值线(x) ,警告线(x±2s) , 失控线(x±3s) 。还应填齐图纸上的各项, 此即成为一张质控“空图” 结果分析;1)正常分布规律 2)异常表现; 曲线漂移、趋势性变化、精密度的变化、失 控 78.一个组分的色谱峰可用哪些参数描述? 他们在色谱分析中各有什么意义 基线、峰宽、半峰宽、峰高和峰的保留时间。 峰宽、半峰宽的大小反映了色谱柱或所选的 色谱条件的好坏;保留时间用来描述层析峰 在层析图上的位置;峰高与组分的浓度有关 79.试述米氏常数在酶学分析中的意义 1)鉴别酶的最适底物 2)发现同工酶 3)判 断在细胞内酶的活性是否受底物抑制 4)测 定不同抑制剂对某个酶 Km 及 Vmax 的影响, 可以区别该抑制剂是竞争性抑制剂还是非竞 争性抑制剂 5)设计适宜的底物浓度 80.高效液相色谱仪主要由哪些系统组成? 其关键部件是什么 流动相输送系统、 进样系统、 色谱分离系统、 检测记录数据处理系统;检测器系统 81.简述标本溶血对临床生化测定的影响及 防治的方法 使很多指标明显异常。 注射器和容器要清洁, 抽血时使用针头不能过小,用力不能过大, 控制止血带的使用时间,抽血后要取下针头 将血液注入容器内,混匀抗凝剂时不要用力 过大 82.如何确定参考值?应用时应注意哪些问 题? 参考值指对某一规定人群进行抽样测定得到 的均数值,它的建立包括参考个体、参考总 体、参考样本、准确测定、统计学处理、确 定参考值 注意问题: 1) 参考值的使用有一定的范围仅 适合于符合参考个体要求的参考人群 2)参 考值范围不能盲目的作为正常与疾病的分界 点 3)应注意年龄、性别、饮食、药物等因 素的影响 83.何谓临床灵敏度?临床灵敏度高的诊断 试验有哪些用途? 指在患病者中,用该诊断试验检查得到阳性 结果的百分率。 1)拟诊为严重但疗效好的 疾病,以防漏诊 2)拟诊为有一定治疗效果 的恶性肿瘤,以便早期确诊及时治疗 3)存 在多种可能疾病的诊断,可排除某一诊断 4) 普查或定期健康体检,能筛选某一疾病,以 防漏诊 84.试述溶血对生化试验的干扰机理 一是血细胞中高浓度组分逸出,使测定结果 增高,二是血细胞成分进入血清后因化学反 应而引起其他物质的浓度改变,三是血红蛋 白本身颜色对检测的光学干扰。 85.何谓临床特异度?临床特异度高的诊断 试验哟哪些用途? 指在非患病者中应用该诊断试验获得阴性结 果的百分比。 1)拟诊患有某病的概率较大 时,以便确诊 2)拟诊疾病严重,疗效与预 后均不好的疾病,以防误诊,尽早解除病人 的压力 3)拟诊疾病严重且根治方法具有较 大损害时,需确诊,以免造成病人不必要的 损害 86.简述影响检验结果的生物学因素 (一)生理因素对生化检验结果的影响:年 龄、性别、运动、情绪、体位改变、妊娠、 生理性波动(二)饮食和药物的影响 87.酶的国际单位如何规定?如何根据吸光 系数计算酶的活性单位浓度? 规定 1IU 指在规定条件下, 每分钟催化 1umol 底物转化为产物所需要的酶量 酶单位/升=(A 测定-A 对照)*(每一酶单 位规定的保温时间/实际反应保温时间)*V 总*106/L*V 标*ε 88.何谓生化检测的基质效应?该如何避免 基质效应的产生 基质效应是指标本中除分析物以外的其它 成分对分析物测定值的影响 减少基质效应的主要措施包括: 1、 改进 室间质评样品,使其作用更像新鲜人血清; 2、改进仪器设计及试剂组成; 3、选择方法 及方法学参数,使其适应性更强


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