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生物分离与纯化技术模拟试卷十答案


生物分离与纯化技术模拟试卷十答案
考试学科 考生班级 生物分离与纯化技术 组、命题教师 系主任 课题组 考场 考生姓名 考号





线

一、名词解释(每小题 3 分,共 15 分) 1.化学萃取:则利用脂溶性萃取剂与溶质之间的化学反应生成脂溶性复合分子实现溶质向有机相的分配。 2.

微孔膜过滤:又称“精密过滤” ,是最近 20 多年发展起来的一种薄膜过滤技术,主要用于分离亚微米级颗粒,是目 前应用最广泛的一种分离分析微细颗粒和超净除菌的手段。 3.转型:即按照使用要求人为地赋予树脂平衡离子的过程。 4.亲和层析:是利用生物活性物质之间的专一亲和吸附作用而进行的层析方法。是近年来发展的纯化酶和其他高分子 的一种特殊的层析技术。 5.选择变性沉析:是利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子对某些物理或化学因素敏感性不同,而有选择地使之变性沉析,以达到目的物与杂蛋白分离的技术, 称为选择变性沉析。 二、单选题(每小题 1 分,共 15 分) 1.网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质, 一般用下列哪种溶液洗脱。 A.水 A.加热 B.高盐 B.调 pH C.低 pH D. 高 pH 二 D.层析 C.与蛋白质结合成不溶性蛋白 D.调节蛋白质溶液 pH 到等电点 2.下列哪项不属于发酵液的预处理: ( D ) C.絮凝和凝聚 3.盐析法沉淀蛋白质的原理是( B ) A.降低蛋白质溶液的介电常数 B.中和电荷,破坏水膜 4.分子筛层析纯化酶是根据( C )进行纯化。 A.根据酶分子电荷性质的纯化方法 A 氢型 B 钠型 C 铵型 D 羟型 6.超临界流体萃取法适用于提取(B ) A、极性大的成分 B、极性小的成分 C、离子型化合物 D、能气化的成分 E、亲水性成分 7.蛋白质类物质的分离纯化往往是多步骤的,其前期处理手段多采用下列哪类的方法。 ( B ) A.分辨率高 A.凝胶过滤 C.亲和层析 A 0.02~10?m A、凝胶排斥 A、亲和沉淀 B.负载量大 B.离子交换层析 D.纸层析 C ) ( B ) D、流速过低 A ) B 0.001~0.02?m C <2nm D < 1nm B、凝胶吸附 C、柱床过长 C.操作简便 D.价廉 8.针对配基的生物学特异性的蛋白质分离方法是( C ) 。 B.调节酶溶解度的方法 C.根据酶分子大小、形状不同的纯化方法 D.根据酶分子专一性结合的纯化方法 5.下列哪一项不是阳离子交换树脂 ( D ) ( D ) 题目 得分 评卷人 题目 一 得分 评卷人

9.反渗透膜的孔径小于(

10.凝胶层析中,有时溶质的 Kd>1,其原因是

11.将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物,该复合物可选择性地与蛋白质结合,在一定条件下沉淀出来,此方法称为( B、聚合物沉淀 C、金属离子沉淀 D、盐析沉淀 12.下面关于亲和层析载体的说法错误的是( B ) A、载体必须能充分功能化。 B、载体必须有较好的理化稳定性和生物亲和性,尽量减少非专一性吸附。 C、载体必须具有高度的水不溶性和亲水性。 D、理想的亲和层析载体外观上应为大小均匀的刚性小球。 13.在萃取液用量相同的条件下, 下列哪种萃取方式的理论收率最高 A.单级萃取 B.三级错流萃取 C.三级逆流萃取 D.二级逆流萃取 14.不能用于糖类提取后的分离纯化的方法是(B ) A、活性炭柱色谱法 B、酸碱溶剂法 C、凝胶色谱法 D、分级沉淀法 E、大孔树脂色谱法 D、乙醚 E、氯仿 题目 三 15.用大孔树脂分离苷类常用的洗脱剂是(B ) A、水 B、含水醇 C、正丁醇 三、判断题(每小题 1 分,共 10 分) 1.有机溶剂沉析分辨能力比盐析高。 (√ ) 2.纳米过滤膜孔径最小。 (× ) 3.离子交换速率总是取决于内部扩散速率。 (× ) 4.酚型树脂则应在 pH 小于 9 的溶液中才能进行反应。 (× ) 5.层析分离是一种化学的分离方法。 (× ) 6.在降速干燥阶段,干燥速度由水的表面汽化速度即外扩散所控制法。 (× ) 7.盐析反应完全需要一定时间,一般硫酸铵全部加完后,应放置 30min 以上才可进行固-液分离。 (√ ) 8.分配系数 K 与溶质的浓度和相体积比无关,它主要取决于相系统的性质、被萃取物质的表面性质和温度。 (√ ) 9.渗透压冲击是各种细胞破碎法中最为温和的一种,适用于易于破碎的细胞,如动物细胞和革兰氏阴性菌。 (√ ) 10.化学萃取即溶质根据相似相溶的原理在两相间达到分配平衡,萃取剂与溶质之间不发生化学反应。 (×) ( C )

得分

评卷人

装 四、填空题(每小题 1 分,共 15 分)



线 题目 四 得分 评卷人

1.结晶包括三个过程(过饱和溶液的形成) 、 (晶核的形成)和(晶体的生长) 。 2.过饱和溶液的形成方法有(饱和溶液冷却) 、 (部分溶剂蒸发) 、 (解析)和(化学反应结晶) 。 3.物料中所含水分可分为(结合水)和(非结合水)三种; 4.根据晶体生长扩散学说,晶体的生长包括(溶质借扩散作用从溶液中转移到晶体的表面) 、 (溶质长入晶面放出结晶热)和(结晶热传递回到溶液中)三个 过程; 5.分子筛色谱也称(凝胶色谱)的主要应用是(脱盐)和(分级分离) 五、简答题(每小题 7 分,共 35 分) 1.试列举常见的吸附剂。 (1)活性炭(2)白陶土(白土、陶土、高岭土) (3)磷酸钙凝胶(4)氢氧化铝凝胶 (5)氧化铝(6)硅胶(7)滑石粉(8)硅藻土(9)皂土(10)沸石(11)聚酰胺粉(12)大网格聚合物吸附剂 2.离心分离技术基本原理。 是基于固体颗粒和周围液体密度存在差异,在离心场中使不同密度的固体颗粒加速沉降的分离过程。 不同密度或不同大小及形状的物质在重力作用下的沉降速率不同,在形成密度梯度的液相体系中的平衡位置不同。离心分离过程就是以离心力加速不同物质沉 降分离的过程。被分离物质之间必须存在或经人为处理产生的密度或沉降速率差异才能以离心方法进行分离。离心分离方法中差速离心法操作最简便,使用最 广泛,但其分离纯化分辨率低于密度梯度离心。 3.生物分离技术的基本涵义及内容。 基本涵义:生物分离技术是指从动植物与微生物的有机体或器官、生物工程产物(发酵液、 培养液)及其生物化学产品中提取、分离、纯化有用物质的技术过程。 内容主要包括:离心分离、过滤分离、泡沫分离、萃取分离、沉淀(析)分离、膜分离、层 析(色谱)分离、电泳分离技术以及产品的浓缩、结晶、干燥等技术 4.树脂的再生(或称活化) 所谓树脂的再生就是让使用过的树脂重新获得使用性能的处理过程,树脂的再生反应是交换吸附的逆反应。再生方法可根据污染情况和条件而定,一般阳树脂 在软化中易受 Fe3+污染,清除铁化合物的方法,通常是用加抑制剂的高浓度盐酸(10%~15%)浸泡树脂 5~12h,甚至更长。也可用柠檬酸、氨基三乙酸、EDTA 等络合物进行处理。阴树脂易受有机物污染,可用 10%NaCl+2%~5%NaOH 混合溶液浸泡或淋洗 5.影响有机溶剂沉析的因素 (1)温度 (2)生物样品的浓度 (3)pH (4)金属离子 (5)离子强度 六、案例分析题(共 10 分) 一般生化药物结晶的条件? 1)纯度 :纯度应不低于 50% ,有时虽然纯度不高,若能创造条件,如加入有机溶剂和制成盐等,也能得到结晶。 2)浓度;一般要求结晶液的浓度较高 ,以利于溶液中溶质分子间的相互碰撞聚合。 3)pH 值:一般选择在生化药物 pI 附近处,有利于晶体析出。如溶菌酶的 5%溶 液,pH9.5~10,在 4℃放置过夜便析 出结晶。 4)温度:通常在低温条件下进行,低温不仅溶解度低,而且不易变性,又可避免细 菌繁殖。在中性盐溶液中结晶时,温度可在 o℃至室温的范围内选择。在 有机溶剂中一般要求低温,但温度过低时,有时由于粘度大会使结晶些成变慢,可在低温时析出结晶后适当升温。通过降温促使结晶时,如降温快,则结晶粒 小,降温慢则颗粒大。生化制药愿要结晶颗粒小的,不包含杂质,减少给粉碎带来的麻烦。 5)时间:结晶的形成和生长常需要时间,要放置,如果在适合的条件下,在几个小时或几分钟内便可析出结晶。生化制药上要求在几小时之内能完成,时间 不宜过长。 6)晶种:不易结晶的生化药物常加晶种 。 题目 六 得分 评卷人 五 题目 得分 评卷人


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