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单克隆抗体1


? 复习提问:
? 1、动物核移植,克隆动物的定义? ? 2、描述动物核移植的过程? ? 3、核移植过程中用到的技术手段? ? 4、用什么方法激活重组细胞分裂和发 育? ? 5、什么样的细胞可以作为受体细胞? ? 6、动物核移植的应用?

植物体细胞杂交过程:
植物细胞A 原生质体的 制备 原生质体的 融合 去除细胞壁 原生质体A 植物

细胞B

去除细胞壁
原生质体B 诱导融合

杂合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂(脱分化)
愈伤组织 分化发育(再分化) 杂种植株

筛选

组织培养

1、如果让动物细胞进行融合/杂交,应 注意动、植物之间的哪些区别?
?无细胞壁 ?全能性受限制,不能发育成杂种动物

2、动物细胞融合与植物细胞杂交的不同:
? 无需去除细胞壁 不能培养成新的动物个体

3、请设计动物细胞融合的流程。

不同DNA的 两个细胞

动 物 细 胞 融 合 过 程

1、为什么可以 用灭活病毒?
病毒表面含有的糖 蛋白和一些酶能够使 细胞膜上的蛋白质分 子和脂质分子重新排 布,细胞膜打开,细 胞发生融合。

灭活的病毒

2、病毒不灭 活可以吗?
有丝分裂
两个完整的 杂交细胞

不灭活的话会感 染细胞,而不能诱 导细胞融合。

一、动物细胞融合(细胞杂交) (P52)
2.结果:形成含有2或多个细胞信息物质的单核杂交细胞
3.融合原理:细胞膜的流动性 物理法:离心、振动、电激 4.诱导方式 化学法:聚乙二醇(PEG) 生物法:灭活的病毒 5.意义: ?突破有性杂交局限,使远缘杂交成为可能。 6.应用 ?成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生 物新品种培育等的重要手段。 ?重要用途:利用细胞融合技术发展起来的 杂交瘤技术为制备单克隆抗体开辟了新途径

指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 1.概念:

阅读课本P52最后一段至P53第一段, 回答以下问题:
1、抗体是由何种细胞产生的?
2、一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗? 3、动物机体免疫反应产生的抗体只有一种 吗? 4、简述获得抗体的传统途径? 这种方法获得的抗体有什么缺陷?

1.抗体是由何种细胞产生的? B淋巴细胞——浆细胞(效应B细胞) 2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗? 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异 性抗体。 3.动物免疫反应产生的抗体只有一种吗? 针对不同抗原,B淋巴细胞可以产生 百万种以上的抗体,每种抗体对特定 的抗原具有特异性免疫作用。

4.简述获得抗体的传统途径? 这种方法获得的抗体有什么缺陷? 传统血清抗体的制备方法:向动物 体内反复注射某种抗原,使之产生抗 体,然后从动物血清中分离所需要的 抗体。

缺陷:产量低、纯度低、特异性差

怎样获得大量高纯度抗体呢?
科学家的设想:克隆(无性繁殖)单一的B淋 巴细胞,形成细胞群,产生大量高纯度抗体。 存在的困难: 体外培养的B淋巴细胞不可 无限增殖 问题1:哪种细胞可以无限增殖呢? 恶性肿瘤细胞 问题2:怎样让细胞既能大量繁殖,又能产 生专一抗体呢? 特异性B淋巴细胞与肿瘤细胞进行细胞融 合,制备单克隆抗体

二、单克隆抗体的制备 (阅读课本,思考)

1:怎样让动物产生特异性针对某种抗原的B淋巴细
胞(浆细胞)? 对动物注射这种抗原,产生免疫反应 2:诱导融合后,培养液中会有几种细胞?如何处理? 5种(B—B;B—瘤;瘤—瘤;B细胞;瘤细胞). 用特定的选择性培养基筛选

3:从动物体内提取B淋巴细胞时,能否确保B淋巴细
胞的单一性?怎样筛选出符合要求的杂交瘤细胞呢? 不能,可能存在多种B淋巴细胞,融合为多种杂交瘤 细胞。 需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选后,才能 获得足够数量的能分泌所需专一抗体的杂交瘤细胞。

单克隆抗体制备过程
注射抗原 B淋巴细胞 细胞融合 筛选(选择性培养基)

骨髓瘤细胞

杂交瘤细胞 特点: 既能迅速大 量增殖,又 能产生专一 抗体。
体内培养

杂交瘤细胞 细胞培养 克隆化培养、抗体检测、多次筛选 足够数量、能分泌 单一抗体的细胞群

体外培养

单克隆抗体

单克隆抗体制备流程图
小鼠免疫 B-B细胞 诱导 融合 B-瘤细胞 筛选培养 杂交瘤细胞 (B-瘤细胞)

B淋巴细胞
骨髓瘤细胞

瘤-瘤细胞 选择性培养基 未融合细胞 体外培养

克隆化培养 足量单一类型 抗体检测 杂交瘤细胞 多次筛选

单克隆抗体 小鼠腹腔 体内培养

? 思考与讨论: ? 什么是单克隆抗体?
由单个B淋巴细胞进行无性繁殖克 隆成细胞群,由这样的细胞群产 生的化学性质单一,特异性强的 抗体叫单克隆抗体

单克隆抗体的优点:
纯度高,特异性强,灵敏度高,产量大

三、单克隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂——最广泛的用途

准确、高效、简易、快速
如:同位素标记单克隆抗体,可诊 断肿瘤、心血管畸形等

主要用于癌症治疗 (2)治疗疾病和运载药物:

生物导弹=单克隆抗体+药物,治疗肿瘤
(“生物导弹” ——单抗制导瞄准,药物为弹药)

优势:既不损伤正常细胞,又减少了用药 剂量,具有疗效高,毒副作用小
——瞄准癌细胞的生物导弹

动物细 胞融合

过程: 原理:细胞膜的流动性 意义:突破有性杂交局限,使远缘杂交成为可能 应用:主要用于制备单克隆抗体 制备过程:

单克隆 抗体制备

特点:特异性强,灵敏度高,产量大 应用:用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物

练习:
1.在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中, 正确的是( B ) A.结果是相同的 B.杂种细胞的形成过程基本相同

C.操作过程中酶的作用相同
D.诱导融合的手段相同

2.用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,科学家 得到杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆 抗体,与骨髓瘤细胞融合的是( A ) A.经过免疫的B淋巴细胞 B.经过免疫的T淋巴细胞 C.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞

3. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞, 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( C ) ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A. ②④ C. ①②③④ B.①③⑤ D.②③

5.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破伤 风杆菌抗体的实验方案 A (1)该实验方案的目的是: 制备单克隆抗体 (2)该方案能达到预期效果吗?为什么? 不能,没有注射抗原,无法获得产生 单一抗体的B淋巴细胞。 B淋巴细胞 (3)A是从小鼠的脾脏中取得__________ 该 抗体 细胞能够产生______ 。
骨髓瘤细胞

B
杂交瘤细胞

C 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔

细胞融合 (4).图中B为________________过程,常 体外培养 灭活的病毒 用_________________诱导,该细胞继承 分泌专一抗体 双亲细胞的遗传特性,既能__ ________, 又能___________。 迅速大量增殖


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