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实验一 酪蛋白制备


生物化学实验
2009

生物化学实验规则
实验前必须认真预习实验内容 实验过程中认真按照实验步骤和操作规程进行实验,保持 实验过程中认真按照实验步骤和操作规程进行实验, 安静 结束实验做好各自的卫生工作,由指导老师同意,签字之 结束实验做好各自的卫生工作,由指导老师同意, 公用,个人) 后方可离开实验室 (公用,个人) 安排值日生( 安排值日生(8次) 及时整理实验报告

实验一 牛乳中酪蛋白的制备
实验目的:学习蛋白粗提方法. 实验目的:学习蛋白粗提方法. 相关知识点:蛋白的特性与蛋白的分离纯化, 相关知识点:蛋白的特性与蛋白的分离纯化, 牛乳中的成分,酪蛋白的特性. 牛乳中的成分,酪蛋白的特性. 实验重点:利用等电点原理分离牛乳酪蛋白. 实验重点:利用等电点原理分离牛乳酪蛋白.

分离纯化的一般流程
获得蛋白质溶液
机械,化学方法破细胞壁

分离蛋白或浓缩蛋白

等电点沉淀,盐析 有机溶剂

纯化蛋白

离子交换,凝胶过滤,亲和

纯度鉴定

电泳,毛细管电泳,HPLC

牛乳
等电点(pH)

乳清蛋白

酪蛋白
溶解性(有机溶剂)

杂蛋白

酪蛋白纯品

(本次实验仅用乙醇) 本次实验仅用乙醇)

操作步骤
4ml牛奶 4ml牛奶 调节pH 加入4mLpH4.7缓冲液 缓冲液, 调节pH 加入4mLpH4.7缓冲液,摇匀 离心(一人一支) 离心(一人一支) 水洗涤(4ml, 4000rpm,5min) 水洗涤(4ml,3次,4000rpm,5min) 4ml乙醇离心一次 再加4ml乙醇用玻棒 乙醇离心一次, 醇洗涤 (4ml乙醇离心一次, 再加4ml乙醇用玻棒 搅匀, 漏斗中滤干,60℃ 搅匀,倒入 漏斗中滤干,60℃) 称重,计算(预先称滤纸重量,小数点后两位恒重) 称重,计算(预先称滤纸重量,小数点后两位恒重) 保存样品(2ml离心管 写上学号) 离心管, 保存样品(2ml离心管,写上学号)

离心机的使用
平衡! 20位同学一组 20位同学一组

SDS-PAGE示意图 示意图

电泳分离后,凝胶上的蛋白 质可以被染色(考马斯亮蓝 可以与蛋白质结合)

logMr=K-bX, logMr=K-bX, Mr - 分子量 X - 迁移率 k,b - 常数

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