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【精选】人教版高中生物选修1专题5 课题1《DNA的粗提取与鉴定》word导学案-生物知识点总结

专题 5 课题 1 DNA 的粗提取与鉴定 一、基础知识 (一)提取 DNA 的方法 提取生物大分子的基本思路是选用一定的 或 方法分离具有不同物理或化学性质的生物 大分子。对于 DNA 的粗提取而言,就是要利用 DNA 与 RNA、蛋白质和脂质等在 和 性质方面 的差异,提取 ,去除其他成分。 (1)DNA 的溶解性: (1)DNA 的溶解性: ? DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的 盐浓度就能使 充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。 ? 此外,DNA 不溶于 溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于 酒精。利用这一原理,可以将 DNA 与蛋 白质进一步的分离。 (2)DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性: o 蛋白酶能水解 ,但是对 DNA 影响。大多数蛋白质不能忍受 60—80 C 的高温,而 DNA 在 ℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ,但 对 DNA 影响。 (二)DNA 的鉴定 在 条件下,DNA 遇 会被染成 色,因此二苯胺可以作为鉴定 DNA 的 试剂。 二、实验设计 (一)实验材料的选取 凡是含有 的生物材料都可以考虑,但是使用 的生物组织,成功的可能性更 大。 (二)破碎细胞,获取含 DNA 的滤液 动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的 ,同时用 玻璃棒 ,过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞,需要先用 溶解细胞膜。 例如,提取洋葱的 DNA 时,在切碎的洋葱中加入一定的 和 ,进行充分的搅拌和研 磨,过滤后收集研磨液。 (三)去除滤液中的杂质 方案一 利用 DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中 的不同,通过控制 NaCl 溶液的浓度去除杂 质。 方案二 直接在滤液中加入嫩肉粉,反应 10~15min,嫩肉粉中的 能够分解蛋白质。 方案三 将滤液放在 ℃的恒温水浴箱保温 10~15min,注意 范围 。 (四)DNA 的 析出与鉴定 1、将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积 、 的酒精溶液(体积分数为 ),静置 min,溶液中会出现 ,这就是粗提取的 DNA。用玻璃棒 搅拌,卷起丝状物, 并用滤纸吸取上面的水分。 2、取两支 20ml 的试管,各加入物质的量浓度为 的 NaCl 溶液 5ml,将丝状物放入其中一 支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管中各加入 4ml 的 试剂。混合均 匀后,将试管置于 中加热 5min,待试管 后,比较两支试管溶液颜色的变化,看看溶解有 DNA 的溶液是否变 。 实例:用鸡血细胞液粗提取 DNA 并鉴定(苏教版必修 2) 步骤 操作 图示 1、提取鸡 将制备好的鸡血细胞液(已在课前配好)5~10mL,注入到 血细胞的细 50ml 烧杯中。向烧杯中加入 20mL,同时用玻璃棒沿一个方 胞核物质 向快速搅拌 5min,然后,用放有纱布的漏斗将血细胞过滤至 1000mL 的烧杯中,取其滤液。 高中数学、数学课件、数学教案、数学试卷、高中数学试题。 2、溶解细 胞核内的 DNA 3、析出含 DNA 的粘稠 物 4、滤取含 DNA 的粘稠 物 5、将 DNA 的粘稠物再 溶解 6、过滤含 DNA 的氯化 钠溶液 7、提取含 杂质较少的 DNA 将物质的量浓度为 40 mL 加入到滤液中,并作玻璃 棒沿一个方向搅拌 1min,使其混合均匀,这时 DNA 在溶液中呈溶 解状态。 沿烧杯内壁缓缓加入 ,同时用玻璃棒沿一个方向不 停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现。继续加入蒸馏水,溶 液中出现的黏稠物会越来越多。当黏稠物不再增加时停止加入蒸 馏水。 用放多层纱布的漏斗,过滤溶液至 1000 mL 的烧杯中。取纱 布上的 。 取一个 50 mL 烧杯,向烧杯内注入物质的量浓度为 20 mL。用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至 NaCl 溶液中,用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌 3min,使黏稠物尽可能 多地溶解于溶液中。 取一个 100 mL 烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤以上溶液。 取其滤液(DNA 溶于 中)。 在上述滤过的溶液中,加入 的、体积分数为 50 mL(加入时动作要慢),并作用玻璃棒沿一个 方向搅拌,溶液中会出现含杂质较少的丝状物。当玻璃棒上出 现丝状物缠绕时,继续慢慢搅拌,至不再增加时,用玻璃棒将 丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。 8、DNA 的鉴 取两支 20 mL 的试管,各加入物质的量浓度为 5mL,将丝 定 状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后 ,向两支试 管中各加入 4 mL 的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管 置于沸水中加热 5min,等试管冷却后,观察并且比较两支试管中 溶液颜色的变化。 三、操作提示 1、以血液为实验材料时,每 100ml 血液中需要加入 3g ,防止 。 2、加入洗涤剂后,动作要 、 ,否则容易产生大量的泡沫,不利于后续步骤地操作。 加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要 ,以免加剧 ,导致 DNA 分子不能形成絮 状沉淀。 3、二苯胺试剂要 ,否则会影响鉴定的效果。 四、课题成果评价 1、是否提取出了 DNA 观察你提取的 DNA 颜色,如果不是白色丝状物,说明 DNA 中的 蓝色说明实验 ,如果不呈现蓝色,可能所提取的 DNA 现 ,需要重新制备。 2、分析 DNA 中的杂质 本实验提取的 DNA 粗制品有可能仍然含有 、 、 3、不同实验方法的比较 较多;二苯胺鉴定出现 ,或是实验操作中出 等杂质。 高中数学、数学课件、数学教案、数学试卷、高中数学试题。 对于不同的实验方法,本课题可以采用分组的方法进行研究。首先选取不同的实验材料, 其次同种材料还可以采用不同方法,从多方面比较实验结果,如 DNA 的 、 ,二苯 胺显色的 等,看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好 。 五、课题延伸 本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物,在严格的科学实验中很少使用。实验室提取高纯度的 DAN 时

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